如何解决蛋白质分离纯化过程中的蛋白质变性问题

 

    蛋白质分离纯化的方法，要根据不同的处理物和目的蛋白而选择不同的方法。所以在纯化之前，应该要对目的蛋白一些理化性质等要加以了解。不过蛋白质纯化最常用的是饱和硫酸铵法。本文主要介绍如何解决蛋白质分离纯化过程中的蛋白质变性问题。

　　蛋白质变性影响因素：

　　1，一般温度高于60摄氏度持续一段时间会变性。不同蛋白耐受高温不同，具体问题具体分析。

　　2，高浓度有机溶剂，如丙酮，乙醚，巯基乙醇等。

　　3，含有蛋白酶环境会分解蛋白。

　　4，变性剂，如高浓度盐酸胍和尿素。

　　5，盐溶液，在一定浓度盐作用下，会使蛋白中折叠在内部的疏水集团暴露而改变折叠结构。

　　6，pH值变化，强酸强碱条件下会破坏蛋白质结构。等电点时蛋白质沉淀。

　　因此，克服和避开上述内容可以减少变性。具体措施：

　　1，控制温度，pH值。避开强酸强碱和等电点。

　　2，尽量减少和有机溶剂和变性剂的接触。

　　3，添加蛋白酶抑制剂，可以减少蛋白分解。

　　4，盐浓度适宜，不能太高。

　　5，增加NMSF，N-马来酰亚胺，去氧胆酸钠等抗氧化物质，可以防止蛋白被氧化变性。

　　掌握了蛋白质变性问题影响因素，避免这些问题，即可有效的防止在蛋白质分离纯化过程中的蛋白质变性。